以凱氏定氮法測定氮含量換算蛋白質的方法, 是國際上通用的標準方法,操作簡單,測定結果重復 性和重現性都很好,廣泛用于各種食品、谷物、飼料 等樣品的蛋白質含量測定。此法又分為常量、半微 量、微量法三種。其測定原理相同,主要區別在于常 量法的樣品及試劑用量較微量法多。而微量法則具 有實驗規模小,實驗費用低的優點。但微量法的準 確度和精密度比常量法要差一些。國家標準規定為 半微量凱氏定氮法。凱氏定氮法整個測定過程分為 消解、蒸餾、滴定三步[ 15] 。 要使測定結果有更好的正確度、準確度和精準 度,采用高效的方法和認真細致掌握測定的每個步 驟、各個細節及相應的注意事項,就顯得尤為重要。 本文就此進行深入的探討。 1 原理 蛋白質是含氮的有機化合物。樣品與硫酸和催 化劑一同加熱消化,使蛋白質分解,分解生成的胺基 與硫酸結合生成硫酸銨。然后堿化蒸餾使氨游離, 用硼酸吸收后再以硫酸或鹽酸標準溶液滴定,根據 酸的消耗量乘以換算系數,即為蛋白質含量。
1. 1 消化 有機物中的胺基在強熱和 Cu S O 4、濃 H 2SO 4作
用下,消化生成(NH 4) 2S O 4,反應式為: 2NH2 +H 2S O 4 +2H+ =(NH 4 ) 2S O 4 (其 中 Cu S O 4 做催化劑)
1. 2 蒸餾 在凱氏定氮器中與堿作用, 通過蒸餾釋放出 NH 3,收集于 H 3BO 3溶液中,反應式為: (NH 4) 2S O 4 +2Na OH=2NH 3 +2H 2O+Na 2S O 4 2NH 3 +4H 3BO 3 =(NH 4) 2B 4O 7 + 5H 2O
1. 3 滴定 用已知濃度的 H 2S O 4( 或 HCI ) 標準溶液滴定, 根據 H 2SO 4( 或 HCI ) 消耗的量計算出氮的含量,然 后乘以相應的換算因子,即得蛋白質的含量,反應式 為: (NH 4) 2B 4O 7 +H 2S O 4 +5H 2O=(NH 4) 2S O 4 + 4H 3BO 3 (NH 4 ) 2B 4O 7 +2HCl+5H 2O =2NH 4Cl+ 4H 3BO 3 實驗裝置圖見圖 1。
依據凱氏定氮法,通過全自動凱氏定氮儀測定 樣品中氮或粗蛋白的方法已得到廣泛的認可和使 用,以下是自動凱氏定氮儀測定魚粉和豆粕中粗蛋 白含量的實驗。
